ПТР немесе полимеразды тізбекті реакция – ДНҚ тізбегін күшейту үшін қолданылатын әдіс.Оны алғаш рет 1980 жылдары жасаған жұмысы үшін 1993 жылы химия бойынша Нобель сыйлығымен марапатталған Кари Муллис жасады.ПТР молекулалық биологияда төңкеріс жасады, бұл зерттеушілерге шағын үлгілерден ДНҚ-ны көбейтуге және оны егжей-тегжейлі зерттеуге мүмкіндік берді.
ПТР – реакциялық қоспаның температурасын жылдам өзгерте алатын термиялық циклдерде орындалатын үш сатылы процесс.Үш кезең - денатурация, жасыту және ұзарту.
Бірінші сатыда, денатурацияда, қос тізбекті ДНҚ жоғары температураға дейін (әдетте 95°C шамасында) қыздырылып, екі тізбекті бір-бірімен ұстайтын сутектік байланыстар үзіледі.Нәтижесінде екі бір тізбекті ДНҚ молекуласы пайда болады.
Екінші қадамда, жасыту кезінде, праймерлердің бір тізбекті ДНҚ-дағы комплементарлы тізбектерге қосылуына мүмкіндік беру үшін температура шамамен 55 ° C дейін төмендетіледі.Праймерлер - мақсатты ДНҚ-дағы қызығушылық тізбегіне сәйкес келетін ДНҚ-ның қысқа бөліктері.
Үшінші қадамда, ұзарту, Taq полимеразаға (ДНҚ полимеразасының бір түрі) праймерлерден ДНҚ-ның жаңа тізбегін синтездеуге мүмкіндік беру үшін температура шамамен 72 ° C дейін көтеріледі.Taq полимеразасы ыстық су көздерінде өмір сүретін және ПТР кезінде қолданылатын жоғары температураға төтеп бере алатын бактериядан алынған.
ПТР бір циклынан кейін нәтиже мақсатты ДНҚ тізбегінің екі көшірмесі болады.Бірнеше цикл үшін үш қадамды қайталау арқылы (әдетте 30-40), мақсатты ДНҚ тізбегінің көшірмелерінің санын экспоненциалды түрде арттыруға болады.Бұл миллиондаған, тіпті миллиардтаған көшірмелерді шығару үшін бастапқы ДНҚ-ның аз ғана көлемін күшейтуге болатынын білдіреді.
ПТР зерттеу мен диагностикада көптеген қолданбаларға ие.Ол генетикада гендер мен мутациялардың қызметін зерттеу үшін, криминалистикада ДНҚ дәлелдемелерін талдау үшін, жұқпалы ауруларды диагностикалауда қоздырғыштардың бар-жоғын анықтау үшін және пренатальды диагностикада ұрықтағы генетикалық бұзылуларды скрининг үшін қолданады.
ПТР сонымен қатар ДНҚ мөлшерін өлшеуге мүмкіндік беретін сандық ПТР (qPCR) және РНҚ тізбегін күшейту үшін пайдаланылуы мүмкін кері транскрипциялық ПТР (RT-PCR) сияқты бірқатар вариацияларда пайдалануға бейімделген.
Көптеген қолдануларына қарамастан, ПТР шектеулері бар.Ол мақсатты реттілік пен сәйкес праймерлердің дизайнын білуді талап етеді және реакция жағдайлары дұрыс оңтайландырылмаған жағдайда қателіктерге бейім болуы мүмкін.Дегенмен, мұқият эксперименталды жобалау және орындау кезінде ПТР молекулалық биологиядағы ең қуатты құралдардың бірі болып қала береді.
Жіберу уақыты: 22 ақпан 2023 ж